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原核蛋白表達及功能分析

蛋白是生命活動的體現(xiàn)者,因此,只有獲取具有正確構(gòu)象和功能的重組蛋白才能進行后續(xù)的生命科學研究。

采用大腸桿菌E.coli表達體系是獲取重組蛋白最重要的手段之一,該方法具有操作方便、成本低,而且重組蛋白含量較高等優(yōu)點。獲取的該蛋白適用于抗體制備、功能分析、細胞實驗以及蛋白相互作用研究等優(yōu)點。當然,該方法獲取的重組蛋白容易形成包涵體、需要復性以及缺乏蛋白后續(xù)修飾等缺點。

 

基本流程

技術優(yōu)勢

(1)       本公司擁有多種原核表達載體系統(tǒng),pET系統(tǒng)(pET21pET28、pET32以及pET41等)(含6×HIS Tag);pGEX系統(tǒng)(pGEX-4T-1pGEX-4T-1)(含GST Tag);以及改良過的pCold冷休克的表達體系,根據(jù)實際需要選擇合適的載體,這對于減少包涵體的形成,提高重組蛋白的可溶性非常關鍵。

(2)       本公司擁有至少7種原核表達宿主菌,常規(guī)的E.coli BL21DE3)、Rosetta、Origami、Arctic Express等,有些宿主菌非常有效的適用于超低溫環(huán)境下原核蛋白的穩(wěn)定和可溶性表達,這對于蛋白功能研究非常關鍵。

客戶須知:

原核蛋白表達及功能分析

 

周期

最終提供客戶資料

原核蛋白表達及功能分析

 

20-30個工作日,視樣品和基因數(shù)目而定。

詳細實驗總結(jié)報告(包括CDS克隆、載體構(gòu)建、測序、總蛋白分析、Western blot鑒定、表達部位分析、純化等)。

 

 

 

 

案例

本實驗在對某昆蟲中分子伴侶基因進行原核表達,采用pET32表達系統(tǒng),同時采用低溫(13℃)環(huán)境下進行該基因的誘導表達,獲取更多的可溶性蛋白,同時進行純化和蛋白功能 

分析,部分結(jié)果如下:

 

            鞭毛蛋白與TLR5胞外區(qū)相互作用的PAGE檢測

 

 

客戶提供:

樣品類型

常見物種(Rat、MouseHuman

其他物種

樣品需要量

 

 

取樣和保存環(huán)境

只需提供NCBI基因序列號

提供組織、細胞以及準確的CDS序列。

 

運輸

杭州市內(nèi)干冰上門取樣;

外地客戶干冰快遞運輸;

組織保存液,冰袋運輸

杭州市內(nèi)干冰上門取樣;

外地客戶干冰快遞運輸;

 

*(經(jīng)本公司評估后,實驗沒有結(jié)果,不收取任何費用)

 


 

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